Аскосфероз (перицистимикоз, перицистомикоз, перицистоз, известковый расплод, меловой расплод, сухой гнилец) - инфекционная болезнь молодых личинок, реже взрослых, которая вызывается сумчатым грибом Ascosphaera apis.
Историческая справка, степень опасности, ущерб. Первые сведения о болезни были опубликованы в 1878 г. в Австро-Венгрии. Затем болезнь была зарегистрирована в Швейцарии, Германии, России. Возбудитель был впервые выделен и подробно описан П.Клауссеном в 1912г.
Вначале ХХв. аскосфероз регистрировали в отдельных странах как спорадическое заболевание.
В настоящее время оно распространено более чем в 50 странах, расположенных на различных континентах с умеренным, субтропическим и тропическим климатом и приобрело значение панзоотии.
Экономический ущерб зависит от интенсивности поражения расплода. В подавляющем большинстве случаев регистрируют смешанное течение болезни с варроозом.
При заклещеванности семей клещом варроа более 15% и хроническом течении аскосфероза в семьях может погибнуть до 65% расплода. Такие семьи часто погибают в зимний период.
Возбудитель. Гриб Ascosphaera apis принадлежит к классу Schizomycetes, роду Ascosphaera. Различают два подвида этого гриба: Ascosphaera apis var. apis и Ascosphaera apis var. major, которые отличаются между собой размерами, конфигурацией спор и плодовых тел. Размер спор A. apis var. apis — 3,8x2,3 мкм, диаметр плодового тела — 32-99 мкм (65,8мкм), A. apis var. major — 3,3-4,2x2,5 и 88,4-168 мкм (128,4 мкм), соответственно. У A. apis var. apis плодовые тела зеленовато-коричневого, у A.apis var.major — черного цвета. Температурный оптимум для образования плодовых тел A. apis var. apis — 30 С, у A. apis var. major — 20 С. Гриб растет на питательных средах (среда Сабуро, сусловый агар, картофельно-декстрозный агар) при температуре 22-36 С, образуя тонкий ползучий мицелий, состоящий из многоклеточных бесцветных гиф толщиной 4,2-12мкм. Клетки гриба многоядерны, мицелий обладает половым диморфизмом. Женский мицелий белого, мужской — желтовато-зеленоватого цвета, который со временем темнеет. При встрече двух разнополых мицелиев на их гифах образуются короткие выросты, на которых формируются половые структуры — гаметагангии. Это многоядерные, недифференцированные на гаметы (половые клетки) образования, отделенные от гиф перегородками. Женский и мужской гаметагангии отличаются друг от друга размерами. Женский гаметагангий (овогоний) значительно больше мужского (антеридий), который переливает свое содержимое (ядра, протоплазма) в женский. После этого сначала происходит кариогамия — слияние ядер, а затем их множественное деление. При ухудшении условий формируется большое число спор, которые склеиваются в компактные споровые шары, называющиеся асками или сумками (рис.107). Зрелый нутриоцит со споровыми шарами называется цистой или спороцистой. Он имеет вид капсулы сферической или грушевидной формы в зависимости от подвида возбудителя.
Споры A. apis устойчивы во внешней среде и могут сохранять жизнеспособность более 15 лет. При температуре 27°С споры сохраняются в течение года. В пустых ульях, на сотах, пчеловодном инвентаре, оборудовании, в меде и перге в условиях пасеки споры гриба остаются жизнеспособными 10 лет. Споры обладают устойчивостью к действию химических средств. Растворы 1%-ного формальдегида, глутарового альдегида убивают споры через 20 мин, 1%-ный раствор перекиси водорода — через 30 мин, 3%-ный раствор хлорной извести и гипохлора — через 10мин.
Эпизоотологические данные. В начале ХХ в. аскосфероз регистрировали как спорадическое заболевание. В настоящее время в европейских странах из всех случаев микозных заболеваний расплода на долю аскосфероза приходится 80%. В Израиле, Австралии вспышка аскосфероза в 1990-х гг. приобрела значение панзоотии.
Предрасполагающими факторами для появления болезни являются холодная влажность в улье, неблагоприятная погода, некомпетентное вмешательство пчеловода, нарушение возрастного равновесия в улье, дефицит в питании, отсутствие воды, недостаток пчел-кормилиц, неоправданно жесткая эксплуатация семей — все это стрессовые факторы, которые являются причиной для появления аскосфероза.
Рис. 107 Возбудитель аскосфероза — плодовые тела Ascosphaera apis Наиболее восприимчивы трутневые личинки, затем пчелиные 3-4-дневного возраста. Поражение расплода в пчелиной семье могут регистрировать в течение всего весенне-летнего периода и осенью с максимумом развития в июне-августе. Возникновение и распространение аскосфероза, как считают многие исследователи, связано с изменением равновесия нормальной микрофлоры в пчелиной семье, организме пчел, личинок и куколок под влиянием многократного скармливания антибиотиков или частых обработок муравьиной или щавелевой кислотами при варроозе. К этому также предрасполагают нарушения зоогигиенических правил содержания пчелиных семей и ухудшение экологической обстановки, повышенная влажность в гнезде, резкие колебания температуры воздуха, необеспеченность пчел пергой, снижение общей резистентности пчел.
Источником болезни служат больные семьи, рои неизвестного происхождения, пчелы-воровки, вредители пчел, инфицированные матки, пакеты пчел, купленные в других хозяйствах, мед, пыльца. Часто болезнь регистрируют в тепличных хозяйствах. Это связано с использованием пыльцы, контаминированной спорами гриба A. apis в качестве подкормок на фоне нарушения зоогигиенических норм: химические обработки растений против болезней высокотоксичными пестицидами; повышенное содержание СО2 в атмосфере теплиц; резкие перепады температур между днем и ночью и постоянный дефицит свежей пыльцы.
Патогенез. Необходимо различать первичное заражение семьи и последующее. В начале заболевания поражаются только ослабленные личинки. Возбудитель проникает во внутрь личинки с кормом. Споры попадают в среднюю кишку и в задней ее части набухают в течение 6 ч, а затем из них образуются гифы, которые разрушают перитрофическую мембрану и проникаютв эпителиальные клетки средней кишки, лизируя ядра и цитоплазму. Мицелий прорастает сквозь все ткани тела личинки, создавая некробиоз в клетках жирового тела с дальнейшим их разрушением, гипертрофию мальпигиевых сосудов, поражение эноцитов и т.д., интенсивно размножается вне тела личинки и образует споры. Свежие споры более патогенны, они могут поразить уже более здоровые личинки. При наличии большого количества микозной массы споры могут проникать во внутрь личинки через покровы тела. Возбудитель вырабатывает фермент N-ацетил-В-глюкозами-нидазу, который разрушает молекулы N*ацетил-глюкозамина — основного компонента хитина (Alonso, 1993). В этом случае споры прорастают на поверхности личинки, образуя мицелий, который разрушает кутикулу, прорастает через нее вовнутрь, а далее, как и в первом случае. Размножаясь на поверхности личинки, гриб сначала покрывает задний конец, а затем все тело белым налетом, личинка набухает, заполняет всю ячейку. Позже личинка высыхает и превращается в сухую, морщинистую массу (мумию) мелообразного вида (рис. 108). При образовании плодовых тел личинки приобретают серый, зеленовато-коричневый или черный цвет. Если ячейки с больными личинками пчелы запечатывают, то мицелий иногда прорастает через крышечки.
Рис. 108 Личинки пчел, мумифицированные грибом Ascosphaera apis Взрослые пчелы пчелиной семьи аскосферозом не болеют, но могут быть носителями возбудителя. В пищеварительной системе обнаруживают споры и кусочки мицелия A. apis. Некоторые семьи являются скрытыми носителями возбудителя без проявления симптомов болезни до тех пор, пока не возникнут благоприятные условия для их развития.
Клинические признаки. Заболевают обычно слабые семьи после длительных похолоданий при повышенной влажности воздуха. В гнезде создается холодная влажность. Условно различают 3 стадии проявления клинических признаков.
1. У личинки наблюдается потускнение цвета. Она вытягивается вдоль стенки ячейки, тактильная чувствительность отсутствует, сегментация нарушена, на дне ячейки отсутствует маточное молочко, далее тело уплотняется, становится серым, сегментация сглаживается. 2. На теле появляется множество отдельных белых нитей мицелия, которые затем покрывают все тело личинки. Он занимает почти весь объем ячейки. Можно увидеть выступивший ороговевший апикальный конец, окруженный желтоватым ободком. При запечатывании белая плесень может иногда прорасти через крышечки ячеек. 3. Происходит обызвествление тела личинки и превращение ее в белую, зеленовато-коричневую или черную мумию продолговатой формы, занимающие 2/3 объема ячейки. Мумии легко вынимаются из ячеек. Многие вскрытые пчелами ранее запечатанные ячейки содержат твердые мумии личинок или предкуколок. Если мумию взять между большим и указательным пальцами и надавить, то она крошится, как мел (рис.108).
Различают слабую стадию — до 10, среднюю — до 20, сильную — свыше 20 погибших личинок на соте. Личинки не всегда мумифицируются. В этом случае клиническая картина проявляется в том, что расплод пестрый, на расплодном соте много пустых ячеек. Семьи плохо развиваются и часто меняют маток.
При сильном поражении в семье может погибнуть более половины личинок. Как правило, заболевание приобретает хронический характер. Иногда болезнь проявляется уже в конце зимы с появлением расплода.
В семьях, где степень поражения достигает свыше 50%, отмечают возбуждение пчел, потемнение сотов, потерю правильности формы ячеек, увеличение в 2-3 раза их размеров. Взрослые пчелы, извлекая погибших личинок из ячеек, выгрызают их из сотов, в результате чего на поверхности отстроенной вощины образуются углубления диаметром 3-5 мм и более. На соседнем соте пчелы оттягивают ячейки с целью сократить расстояние между сотами. В результате на поверхности сотовых рамок наблюдается чередование возвышений и углублений.
В последнее время наблюдается синергизм возбудителя A. apis с грибом Alternaria tennis. В этом случае очищение сотов от погибших личинок затруднено, поэтому края ячеек сильно разъедены и разорваны. Границы ячеек стираются. На поверхности сотов видны черные, коричневые, желтовато-коричневые, темно-серые мумифицированные личинки. Они настолько изъедены и смешаны с воском, что образуют единый бесформенный конгломерат. Высвободить такие личинки очень трудно. Свободно лежащие пораженные личинки напоминают пластинки или округлые образования коричневого, бордового, темно-серого цвета. На поверхности мумифицированные личинки несут массу спорового материала.
Своеобразная клиническая картина наблюдается при совместном протекании аскосфероза с гнильцами. Пораженные личинки вытягиваются вдоль ячейки, дорсальная (верхняя) по верхность выравнивается и покрывается белым мицелием со сформировавшимися плодовыми телами возбудителя A. apis. Вентральная (нижняя) часть чернеет, приобретает вид черной прослойки, характерной для клинических признаков европейского гнильца.
При совместном протекании аскосфероза с варроозом степень тяжести эпизоотологического процесса зависит от степени заклещеванности пчелиных семей клещом Varroa destructor. При слабой заклещеванности пчелиных семей (до 2%) потери расплода со ставляют около 10-15%. Гриб патогенен только для личинок 3-4-дневного возраста. При средней (до 10%) и сильной (свыше 15%) за клещеванности A. apis патогенен для личинок среднего и старшего возраста, а также куколок младшего возраста. Потери расплода составляют 30-35%. В ослабленных семьях при хронической форме заболевания и сильной заклещеванности A.apis становится патогенным практически для всех доимагинальных стадий пчелы. Потери расплода составляют 50-65%.
Диагностика. Диагноз на аскосфероз ставят на основании клинических признаков болезни, результатов микроскопических и микологических исследований пораженного расплода. Учитывают эпизоотологические данные.
Для исследований в ветлабораторию направляют образцы сотов размером 10x15 см (можно и соторамку) с больными и погибшими личинками, куколками и среднюю пробу перги или пыльцы, предназначенную для реализации, в целлофановых пакетах в количестве 10 г от каждой партии. При скармливании пчелам белковой пасты, содержащей цветочную пыльцу, ее образцы в количестве 50 г также направляют на исследование.
Исследования проводят в соответствии с методическими указаниями по лабораторной диагностике аскосфероза.
Аскосфероз следует дифференцировать от аспергиллеза.
Профилактика:
на пасеках необходимо содержать сильные семьи круглый год;
обеспечить семьи достаточным ульевым пространством, вентиляцией, подкормкой сахарным сиропом и пыльцой в голодные периоды. При отсутствии пыльцы использовать подкормки с биологически активными веществами — препараты полизин, полиамин, биоспон, ВЭСП и др.;
методы ухода за семьями должны быть такими, чтобы меньше беспокоить пчел;
перспективен генетический контроль за болезнью. Встречаются семьи, имеющие склонность к удалению мумифицированных личинок не только в открытом, но и в печатном расплоде. Такое поведение контролируется двумя генами: один отвечает за распечатывание ячеек, второй — за удаление мертвых личинок. Оба гена эффективны, если присутствуют в рабочей пчеле в двойном количестве (гомозиготный рецесив). По этому признаку можно отселектировать пчел, устойчивых к аскосферозу. В повседневной практике следует отыскивать семьи, отличающиеся стремлением к более интенсивной чистке гнезда;
ежегодно обновлять 50% сотов в гнезде. Известно, что соты, прослужившие более 3 лет, обсеменены условно патогенной микрофлорой и имеют более мелкие ячейки, чем новые;
ежегодно заменять на пасеке 50% маток. Омоложенные пчелиные семьи более интенсивно чистят гнезда, а молодые матки откладывают большое количество яиц;
скармливать только доброкачественный корм;
не допускать постановки трутневых сотов в ослабленные семьи. Это может вызвать аскосфероз;
в кочевке должны принимать участие только сильные семьи. После переезда в ослабленных семьях часто наблюдают аскосфероз;
обработка пчелиных семей против варрооза щавелевой кислотой при аскосферозной ситуации недопустима;
разводить на пасеках одну породу пчел, приспособленную к климатическим условиям данной местности;
содержать пчелиные семьи в крепких, без щелей ульях, окрашенных для исключения блуждания пчел и трутней в хорошо различимые пчелами белый, голубой и желтый цвета;
размещать пасеки на возвышенных, сухих местах. Через 10-14 дней скашивать траву на территории пасеки. Устанавливать ульи на подставки высотой не ниже 30 см;
уровень кормовых запасов в гнездах в весенний период должен быть постоянно не ниже 8-10 кг на семью.
Меры борьбы. При выявлении аскосфероза пасеку объявляют неблагополучной и проводят ограничительные мероприятия, согласно действующей Инструкции. Запрещают вывоз с неблагополучной пасеки пчелиных семей, маток и продуктов пчеловодства в благополучные хозяйства. Кочевку пчел на медосбор разрешают на специально отведенные места не ближе 5-7 км от благополучных пасек, соблюдают ветеринарно-санитарные правила содержания пчел, не допускают скармливания сахарного сиропа из общих кормушек, предупреждают пчелиное воровство меда. Отсыревшие подушки и холстики заменяют сухими.
Больные семьи перегоняют в продезинфицированные ульи на чистые соты и вощину. Маток меняют. Соты, пораженные сумчатым грибом, перетапливают на воск, соты с медом откачивают, перговые соты перетапливают на воск, сокращают и утепляют гнезда, пчелам дают необходимое количество доброкачественного корма. В ульях полностью открывают летки. Воск от больных семей направляют на технические цели.
Для лечения применят: Нистатин — выпускают в виде порошка и таблеток. В 1мг порошка содержится 4000ЕД действующего вещества, в таблетке — 250 или 500 тыс. ЕД. Хранят препарат в сухом, темном месте при температуре не выше 5 С. Срок годности — 2 года. Препарат скармливают пчелиным семьям неблагополучной пасеки в виде лечебного корма, который готовят в день применения. Для этого таблетки нистатина, рассчитанного по количеству больных семей пчел, тщательно измельчают до порошкообразного состояния и растворяют в прокипяченной теплой (около 40 С) воде (50 мл воды на одну таблетку), а затем добавляют к необходимому количеству сахарного сиропа или готового канди, тщательно перемешивают. Весной нистатин дают с медом или канди из расчета 50 г корма на один сот однократно, корм помещают над клубом пчел в виде лепешки, завернутой в марлю. Лечебный сироп скармливают семьям в чистых кормушках по 100-150 мл на улочку (масса одной улочки пчел — 0,25кг). Расход нистатина для канди и сиропа — 100тыс. ЕД на 0,25кг пчел.
Летом пчелиные семьи орошают с помощью любого мелкодисперсного распылителя теплым 20%-ным сахарным сиропом с добавлением нистатина из расчета 1 млн ЕД нистатина на каждые 100 мл сиропа или кипяченой воды. На один сот расходуют 10-12 мл лечебного раствора. Скармливание препарата с сахарным сиропом или опрыскивание проводят трехкратно с интервалом 3-5 дней. При рецидиве болезни курс лечения повторяют. Перед применением препарата в ветеринарной лаборатории необходимо оттитровать дозу на чувствительность возбудителя, так как препарат применяется давно и доза в каждом конкретном случае может не совпадать с рекомендованной.
Аскоцин — 25%-ный концентрат эмульсии, фунгицидный препарат. Действующее вещество — пропиконазол. Срок годности — один год со дня изготовления. Препарат применяют в весенний и летний периоды путем скармливания лечебного сиропа или опрыскивания. Лечебный сироп готовят в день применения. При скармливании содержимое одной ампулы (0,48 мл аскоцина) растворяют сначала в небольшом количестве кипяченой воды, полученную водную эмульсию затем тщательно перемешивают с 2 л сахарного сиропа (1:1) и скармливают пчелам из расчета 60-70мл на 250г пчел.
При опрыскивании содержимое одной ампулы растворяют в 1,5 л кипяченой воды или слабом сахарном сиропе (1:5), а затем опрыскивают все соты гнезда и стенки улья. На каждый сот расходуют 10-15 мл лечебной жидкости. При первом и втором способах лечения проводят 2-3 обработки с интервалом 3-5 сут.
Унисан — прозрачная бесцветная жидкость со слабым специфическим запахом. В состав препарата входят клортримазол, аскорбиновая кислота и другие активные компоненты. Срок годности — 2 года со дня из готовления. Унисан применяют при аскосферозе и аспергиллезе методом опрыскивания в весенний и летний периоды. Лечебный раствор готовят перед обработкой из расчета 1 мл унисана на 600 мл теплой воды. На один сот с пчелами расходуют 10-15 мл жидкости. Кроме сотов обрабатывают стенки улья, диафрагму. Курс лечения включает 2-3 обработки с интервалом 5-7 дней. При обнаружении больных личинок обработки продолжают до полного исчезновения клинических признаков заболевания.
5%-ная спиртовая настойка йода. Применяют при лечении аскосфероза путем скармливания с сахарным сиропом и опрыскивания. При скармливании 10мл 5%-ной настойки йода растворяют в 1л сахарного сиропа (1:1) и распределяют по семьям пчел в дозе 100 мл на 250 г пчел (одна улочка) трехкратно с интервалом 3- 5 сут. Добавление в лечебный корм препарата КАС-81 в дозе 35мл на 1л сиропа повышает эффективность лечения до 99,1%. Аналогичные результаты получают, если настойку йода применяют путем опрыскивания. Для этого в теплый период 20мл 5%-ной настойки йода растворяют в 1л воды и опрыскивают из мелкодисперсного распылителя все соты, стенки улья, диафрагму, деревянные потолочины в дозе 10-12 мл на один сот трехкратно с интервалом 3-5 сут.
Хороший результат получен при обработке пчел смесью 5%-ной настойки йода с хвойным экстрактом. Смесь готовят следующим образом: 5мл 5%-ной настойки йода растворяют в 1л хвойного сиропа. Сироп готовят из хвои сосны (1 кг хвои опускают в 10л кипящей воды и настаивают в течение 8ч, затем фильтруют) и на его основе готовят 50%-ный сахарный сироп. Курс лечения состоит из трехкратного применения в дозе 100-150 мл на улочку пчел с интервалом 5 дней.
Большое значение имеет дезинфекция. Ульи, рамки и другие деревянные предметы от больных семей дезинфицируют двукратно раствором, содержащим 10% перекиси водорода и 0,5% муравьиной кислоты при экспозиции 4 ч, или 10%-ным раствором однохлористого йода при экспозиции 5ч. Затем инвентарь промывают водой и просушивают.
Соты, освободившиеся от меда, подвергают сортировке, учитывая качество отстройки, возраст, степень загрязненности. Отобранные соты механически очищают, а затем орошают с обеих сторон до заполнения ячеек с помощью дезустановки или гидропульта одним из следующих растворов: препаратом Глак при экспозиции 2,5 ч или раствором, содержащим 10% перекиси водорода и 0,5% муравьиной кислоты — 4ч, либо 4%-ным раствором однохлористого йода — 5 ч. После обработки дезраствором соты промывают водой и просушивают.
Медогонки и металлический инвентарь обеззараживают теми же растворами, что и ульи, с последующим промыванием водой. Мед от пчелиных семей неблагополучной пасеки используют только для пищевых целей. Воск с неблагополучной пасеки направляют на технические нужды или обеззараживают автоклавированием при 127 С 2 ч. Пасеку считают благополучной через месяц после ликвидации болезни и проведения заключительных мероприятий, предусмотренных Инструкцией.
