Диагностика подразделяется на пасечную и лабораторную.
Пасечная диагностика включает:
1. Периодический осмотр пчелиных семей с целью определения их силы для предупреждения их массовой гибели. Сила семей измеряется в улочках. Улочка пчел — пространство между двумя сотами, полностью заполненное пчелами. Если рамка высотой 30 см, то в межрамочном пространстве находится в среднем 250 г, или 2500 пчел.
Осмотр проводят:
1) в первые теплые дни после выставки пчелиных семей из зимовника;
2) в начале мая;
3) перед главным медосбором;
4) после главного медосбора;
5) после осенней противоварроатозной обработки пчелиных семей.
Одновременно с осмотром пчелиных семей берут пробы пчел и расплода, если он имеется на время осмотра, по нижеприведенной методике определяют степень заклещеванности пчелиных семей клещом варроа.
При массовой гибели пчел, как правило, в конце июля — начале августа происходит заметное снижение силы семей, которое можно определить по снижению лета пчел во время медосбора. Осмотр гнезд в это время показывает наличие разновозрастного расплода (5-7 рамок, имеющих сплошной или пестрый вид) и свободных под засев сотов. При заболеваниях масса семей к концу августа может сократиться до 200-700 г. В некоторых ульях пчелы отсутствуют. На дне улья и рядом с ним нет погибших пчел. Осмотр данных семей показывает наличие полностью сформированных кормовых запасов в гнездах на зиму. Иногда корм разворовывается пчелами из других семей.
2. Клинический осмотр расплода семей.
Обращают внимание на общий вид расплода, цвет крышечек запечатанного расплода, другие особенности. По общему виду расплода можно определить заболевания: аскосфероз, аспергиллез, мешотчатый расплод, острый паралич, кашмир-вирус, хронический паралич, вирус черных маточников, европейский и американский гнильцы, сильная степень поражения варроатозом. При подозрении на заболевание берется проба расплода 10х15 см из участка сотовой рамки, где наиболее хорошо выражены характерные клинические признаки.
3. Клинический осмотр взрослых пчел.
По их внешнему виду можно предположить наличие следующих заболеваний: вирус деформации крыла, кашмир-вирус, болезнь черных маточников, острый паралич, болезнь израильского вируса, болезнь «затемненного» («облачного») крыла, хронический паралич, нозематоз, варроатоз, аспергиллез, акарапидоз. При подозрении на одну из перечисленных болезней отбирают пробу взрослых пчел в количестве 30 шт. с явными клиническими признаками.
Лабораторная диагностика включает:
I. Определение заклещёванности пчелиных семей клещом Varroa destructor. Эти исследования можно провести в условиях пасеки:
а) степень заклещеванности пчелиных семей клещами Varroa destructor определяют следующим образом: из семьи отбирают пробу пчел из центральной части гнезда в количестве 70-100 шт. Предварительно готовят 1%-ный водный раствор стирального порошка, температура которого составляет 70- 90°С. Раствор наливают в кювету с белым дном и в нее бросают живых пчёл. После тщательного перемешивания (3 мин.) клещи, если они были на теле пчёл, падают на дно кюветы. Белый цвет дна кюветы обеспечивает удобный подсчет клещей. Пчелы, находящиеся на поверхности раствора, также подсчитываются.
Процент заклещеванности вычисляют по формуле:
А = K/П*100%, где К— количество клещей, П — количество пчел, А — процент заклещеванности;
б) при наличии расплода его заклещеванность определяют, вынимая 50 или 100 развивающихся пчел из запечатанного расплода. На белом фоне расплода хорошо видны клещи. Далее рассчитывают заклещеванность расплода по вышеприведенной формуле. Для определения заклещеванности подсчитывают только самок-основательниц: у них более темный окрас по сравнению с самками-дочерьми. Затем результат, который получили при определении процента заклещеванности пчел, складывают с процентом заклещеванности расплода и делят на 2. Так определяют среднюю заклещеванность пчелиной семьи.
II. Определение наличия в пробах вирусов (метод ПЦР).
Для данных исследований проводят отбор проб пчел следующим образом.
1. Выбираются пасеки с количеством семей от 20 и более штук. Пасеки лучше выбрать разведенческие, для того чтобы была информация о наличии вирусоносительства в племенных семьях, из которых формируют материнские и отцовские семьи.
2. Фиксируют информацию о пасеке:
- месторасположение;
- количество пчелиных семей; направление (медопродуктивное, опыленческое, разведенческое);
- стационарная или кочевая;
- основные медоносы;
- место проведения зимовки пчел (зимовник или открытый воздух);
- проведение противоварроатозных обработок (применяемые препараты, время проведения, кратность);
- отход семей осенью предыдущего года и, если был, то его количество.
3. С каждой пасеки отбирают пробы от 10% пчелиных семей пасеки.
4. При отборе проб записывают зоотехнические показатели каждой семьи: номер семьи, сила (в улочках или в килограммах), количество запечатанного расплода; возраст матки и ее порода (где и когда приобретена).
5. Все данные о семьях заносят в журнал.
6. Для лабораторной диагностики вирусов берут пробу живых пчел в количестве 30-50 шт., помещают в контейнеры и этикетируют. Например, в числителе пишут две первых буквы области или района и номер пасеки; в знаменателе — номер семьи. Пример: (в числителе — Башкирия, пасека № 1; в знаменателе — семья 38). Контейнеры помещают в картонные коробки, где предварительно делают отверстия для вентиляции.
7. Для сохранения пчел живыми в дороге используют недорогие пищевые пластиковые контейнеры объемом 250 или 350 мл, предварительно сделав в них отверстия для вентиляции. В контейнеры необходимо поместить 5-10 г канди. Канди готовится из одной части меда и трех частей сахарной пудры. Мед предварительно стерилизуют на водяной бане в течение 20-30 мин. В таком состоянии пчелы выживают несколько суток.
8. Поступивших в лабораторию живых пчел замораживают для проведения дальнейшего молекулярно-генетического анализа. Заморозка осуществляется при температуре от -20°С до - 30°С в течение 3 часов или более.
В дальнейшем проводится молекулярно-генетический анализ проб на вирусы, включающий:
а) подготовку образцов для выделения тотальной РНК,
б) выделение тотальной РНК,
в) удаление геномной ДНК из образца РНК,
г) проведение реакции обратной транскрипции,
д) оценку присутствия вирусов.
